所謂引物的Tm值，到底有多少意義？

使用者28451654383743342019-10-13 15:46:25

Tm值的定義，是兩段互補的鹼基序列解鏈50%時的溫度。一般的常識是，在設定PCR的program時，Tm值有非常重要的參考意義。我們設計引物時，經常要在引物5’端加上酶切位點，保護鹼基，Kozak等一大串非結合序列。一般將公司給出的兩段引物較低的一個Tm-8℃開始，2℃一個梯度向上遞增，到兩段引物中較高的一個Tm+2℃左右做梯度PCR，一般做5~6個梯度就可以了，不知我的這個經驗大家同意不同意。