pda培養基製作步驟?

pda培養基製作步驟?此使用者已在某日登出2021-12-03 11:31:06

準備工作:首先是準備好試管、棉塞等基本物品,在根據實際情況準備配方材料,本文用於舉例的使用量為土豆200g,葡萄糖20g,瓊脂10g,磷酸二氫鉀3。0g,七水硫酸鎂1。50g,自來水適量,自然PH。

稱取藥品與提取土豆:計算好實際藥品的用量後,用電子天平稱取土豆、葡萄糖、瓊脂,用分析天平稱取磷酸二氫鉀和七水硫酸鎂。按配方放入燒杯中。將土豆洗淨並去皮,稱量其質量。再將其切成小塊放入鍋中,加水1200ml,在電磁爐上按燒水鍵加熱至沸騰,然後調100℃保持15分鐘,趁熱用4層紗布過濾,把濾液加入上面的燒杯中。

加熱溶解:上述的濾液會溶解部分藥品,但是還有大部分藥品沒有溶解,所以我們需要把燒杯放入水浴鍋中(95℃以上加熱,並用玻璃棒不斷攪拌,待瓊脂完全溶解後,在補充水至1000ml)。

裝試管:可用帶膠帽的移液管移取,同時應儘量避免培養液沾在試管口,以免造成汙染。我們可以把燒杯放在熱水的鍋中,這樣可以避免我們在裝樣時培養液會凝固的問題。固體培養基分裝的量一般為試管高度的1/5,這樣可以使得滅菌後製成的斜面比較滿足條件——斜面佔試管的一半。

加棉塞:當第四步完成以後,接下來需要在試管口塞上棉塞,以防止外界微生物進入培養基內造成汙染,同時能夠保證其中有良好的通氣能力。

集中:將全部試管用棉繩捆好放入燒杯中,再在整個棉塞外包紮一層紙,用棉繩紮緊,以防止滅菌時冷凝水潤溼棉塞和棉塞衝出。

滅菌處理:使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌,在121℃,105kpa壓力下滅菌15分鐘。在使用前注意向高壓蒸汽滅菌鍋中加入適量的水,同時要使測溫棒浸沒。

倒斜面:將滅菌後的試管趁熱斜置於棍條上,傾斜度以試管中的培養液佔試管長度的1/2為宜,凝固2個小時後即成斜面培養基(瓊脂95℃溶解、40℃凝固)。

無菌檢查:將滅菌冷卻後的培養基放入25℃恆溫培養箱內培養48小時,若培養基上無雜菌生長,則可以低溫儲存備用。