紫玉魔童2021-12-25 17:52:05正常的活細胞，胞膜結構完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經死亡，這與中性紅作用相反。因此，藉助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養中最常用的死細胞鑑定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現象。 臺盼藍染色後，透過顯微鏡下直接計數或顯微鏡下拍照後計數，就可以對細胞存活率進行比較精確的定量。 臺盼藍染色只需3-5分鐘即可完成，並且操作非常簡單。萊垍頭條
一。 臺盼藍配製：4％臺盼藍母液：稱取4克臺盼藍，加入少量蒸餾水研磨，加0。9%NaCl至100毫升，用濾紙過濾，4℃儲存。或者直接用0。9%的生理鹽水或者PBS配成母液 用的時候用生理鹽水或者PBS稀釋 。垍頭條萊
臺盼藍染色步驟： 1。、4%臺盼藍母液：稱取4g臺盼藍，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4度儲存。使用時。用PBS稀釋至0。4%。（也可買Gibco的成品）； 萊垍頭條
T 2、胰酶消化貼壁細胞，製備單細胞懸液，並作適當稀釋。 萊垍頭條
3、染色：細胞懸液與0。4%臺盼藍溶液以9：1混合混勻。（終濃度0。04%）萊垍頭條
4、計數：在三分鐘內，分別計數活細胞和死細胞。 萊垍頭條
5、鏡下觀察，死細胞被染成明顯的藍色，而活細胞拒染呈無色透明狀。 萊垍頭條
6、統計細胞活力：活細胞率（%）= 活細胞總數/（活細胞總數+死細胞總數）×100% 二。 結晶紫配製： 結晶紫 2。0g 草酸銨 0。8g 95％酒精 20ml 餾水 80ml 先將結晶紫溶於酒精，草酸銨溶於蒸餾水中，然後將兩液混合，靜置48小時使用。此染液穩定，置密閉的棕色瓶中可儲存數月。條萊垍頭
結晶紫染色步驟： 1．在96孔細胞培養板各孔中加0。1ml含5×104～10×4 WEHI-164細胞的培養液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培養箱中培養2～3小時，讓細胞帖壁。萊垍頭條
2．用RPMI-1640培養液10倍遞次稀釋TNF標準品，根據需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0。1ml稀釋的標準品或待檢樣品，每個稀釋度3個重複孔。對照孔6個，3個陽性對照孔各加0。1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔各加100μl RPMI-1640培養液。繼續培養18～24小時。萊垍頭條
3．甩去培養液，用PBS小心洗滌一次，每孔加0。1ml 10％甲醇溶液固定細胞30秒鐘。 垍頭條萊
4．吸去甲醇溶液，每孔加0。1ml結晶紫染液，室溫中放置20分鐘。 萊垍頭條
5．輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養板倒置於吸水紙上吸乾水分。自然乾燥或37℃烘乾。此板可以在室溫中長期儲存。萊垍頭條
6．測定前，每孔加0。1ml 33％醋酸脫色，充分振盪後在570nm處測定光吸收度。用光吸收度（OD）值對樣品稀釋度作圖，比較標準品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測樣品中的細胞因子活性萊垍頭條